云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析 1

陳秀珍,楊克遷,黃力,董志揚,CHEN Xiu-zhen,YANG Ke-qian,HUANG Li,DONG Zhi-yang(**科學院微生物研究所,微生物資源前期開發重點實驗室,**,100080)?

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份擴展閱讀

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份（擴展1）

——葉圍微生物宏基因組文庫的構建和分析(精選1篇)

　　葉圍微生物宏基因組文庫的構建和分析 1

鄭服叢,ZHENG Fu-cong(海南大學環境與植物保護學院,海南儋州,571737;**熱帶農業科學院環境與植物保護研究所,海南儋州,571737)?

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份（擴展2）

——基因組文庫的構建和池化篩選實用一篇

　　基因組文庫的構建和池化篩選 1

基因組文庫的構建和池化篩選

作為物種保護策略的重要部分,建立瀕危畜禽的基因組文庫,可有效保存瀕危畜禽種質資源.BAC(bacterial artificial chromosome )文庫具有高容量、遺傳特性穩定和嵌合體少等優點,因而被用于畜禽基因組文庫的構建.對BAC文庫的構建方法和文庫池化篩選系統作一綜述.

娜日蘇,關偉軍,馬月輝(**農業科學院**畜牧獸醫研究所,**,100193)

朱超(**農業科學院**畜牧獸醫研究所,**,100193;廣西大學動物科學技術學院,南寧,530004)

王會,雷娜(**農業科學院**畜牧獸醫研究所,**,100193;山西農業大學,太谷,030801)

高劍峰(石河子大學生命科學學院,石河子,832003)?

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份（擴展3）

——江西典型紅壤區土壤細菌基因組文庫構建及功能初步分析優選【1】篇

　　江西典型紅壤區土壤細菌基因組文庫構建及功能初步分析 1

江西典型紅壤區土壤細菌基因組文庫構建及功能初步分析

地球上的微生物,僅原核生物細胞總數就大約在4×1030～6×1030,包含的**基因型在106～108種之間[1].因此,微生物所具備的分類、功能、遺傳和系統發育等多樣性在維持生物圈生態平衡和為人類提供資源方面起著重要的作用[2].然而長期以來由于受到研究方法和**的限制,土壤中絕大多數微生物的功能還不清楚.環境樣品的宏基因組學(metagenomics)是對環境樣品中微生物群體基因組進行的分析,該方法在眾多用于獲得未培養微生物的生理和遺傳特性的方法中,逐漸顯示出強大的優勢[3,4].**已有從不同環境樣品的宏基因文庫中,通過功能性篩選獲得新的抗生素、脂肪酶、丁質酶、膜蛋白、4-羥基丁酸脫氫酶等合成基因或相關基因,以及對群落結構組成和功能進行分析的報道[5～9].**也逐步開始有相關研究[10,11].

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份（擴展4）

——土壤微生物的知識實用三份

　　土壤微生物的知識 1

　　土壤微生物的.分離和純化

　　一、實驗目的

　　1、掌握從土壤中分離、純化微生物的原理與方法。

　　2、學會根據微生物培養特征初步判斷未知菌的類別。

　　3、練習微生物接種、移植和培養的基本技術，掌握無菌操作技術。

　　二、實驗原理

　　土壤是微生物生長和棲息的良好基地。土壤具有絕大多數微生物生活所需的各種條件，是自然界微生物生長繁殖的良好基地。因此，土壤是微生物資源的巨大寶庫。

　　牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基，可用于培養細菌。鏈霉素可以抑制細菌和放線菌的生長，對酵母菌和霉菌不起作用。

　　加入一定量鏈霉素的培養基可以從混雜的微生物群體中分離出酵母菌和霉菌。重鉻酸鉀或苯酚對土壤真菌、細菌有明顯的抑制作用，可用于選擇分離放線菌。

　　三、實驗器材

　　1、材料：10cm左右深層土壤。

　　2、培養基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基、馬丁氏培養基、高氏Ⅰ號培養基

　　3、其他物品：試管、三角瓶、燒杯、量筒、電子天平、精密pH試紙、培養皿、高壓蒸汽滅菌鍋、移液槍、槍頭、接種環、酒精燈、鏈霉素（1萬單位/ml）、10%苯酚、無菌水。

　　四、實驗步驟

　　1、土樣采集：取10cm左右深層土壤10g備用。

　　2、制備土壤稀釋液：稱取土壤1g，放入有99mL無菌水的三角瓶中，振蕩均勻，即為稀釋10－2的土壤懸液。然后進行十倍梯度稀釋，依次制備10－3、10－4、10－5、10－6、10－7稀釋度的土壤稀釋液。

　　3、培養基平板制備：按培養基配方各配置牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基、馬丁氏培養基、高氏Ⅰ號培養基各100ml。滅菌后分別倒3個平板。（高氏Ⅰ號培養基滅菌前加入10滴10%苯酚；馬丁氏培養基倒平板前加入2ml去氧膽酸鈉（2%）和0。4ml1萬單位/ml鏈霉素）

　　4、接種：用無菌吸管吸取0。1ml相應濃度土壤稀釋液，以無菌操作技術接種在平板上，涂布均勻。細菌選用10－4、10－5、10－6三個稀釋度接種于牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，放線菌與霉菌選用10－2、10－3、10－4三個稀釋度，分別接種于高氏Ⅰ號培養基、馬丁氏培養基。（一個稀釋度一個平板）

　　5、培養：細菌平板于37℃恒溫培養1～2d，放線菌于30℃培養2～3d，霉菌于30℃培養3～5d，觀察。

　　6、計數：用稀釋水樣檢測平板的菌落計數方法進行計數，報告細菌總數/（CFU?ml―1）

　　7、純化：挑取典型菌落接種于相應平板，培養條件同上，培養純化。

　　五、思考題

　　1、分離放線菌和真菌為什么需要分別加重鉻酸鉀和鏈霉素？

　　2、怎么檢驗培養皿上的某個單菌落是不是純培養？

　　土壤微生物的知識 2

　　土壤微生物的采集一般有土樣采集、增殖培養、培養分離、篩選最后進行純種分離、毒性試驗等。

　　1、采樣：

　　一般在有機質較多的肥沃土壤中，微生物的數量最多，中性偏堿的土壤以細菌和放線菌為主，酸性紅土壤及森林土壤中霉菌較多，果園、菜園和野果生長區等富含碳水化合物的土壤和沼澤地中，酵母和霉菌較多。選擇一定的土壤環境采集土樣，將采集到的土樣盛入清潔的聚乙烯袋、牛皮袋或玻璃瓶中。

　　2、增殖培養：

　　為了容易分離到所需的菌種，讓無關的微生物至少是在數量上不要增加，可以通過配制選擇性培養基，選擇一定的培養條件來**。例如碳源利用的**，可選定糖，淀粉，纖維素，或者石油等，以其中的一種為唯一碳源，那么只有利用這一碳源的微生物才能大量正常生長，而其它微生物就可能**或淘汰。這樣對下階段的純種分離就會順利得多。

　　3、培養分離：

　　盡管通過增殖培養效果顯著，但還是處于微生物的混雜生長狀態。因此還必須分離，純化。在這―步，增殖培養的選擇性**條件還應進一步應用，而且**得細一點，好一點。純種分離的方法有劃線分離法，稀釋分離法。

　　4、篩選：

　　這一步是采用與生產相近的培養基和培養條件，通過三角瓶的容量進行小型發酵試驗，以求得適合于工業生產用菌種。

　　關于菌種的識別，細菌、放線菌、酵母菌和霉菌，每一類微生物在一定培養條件下形成的菌落各具有某些相對的特征，利用觀察這些特征，來區分各大類微生物及初步識別、鑒定微生物。

　　土壤

　　一般取土壤表層5―10cm處土壤，如果土壤有翻動，應更深一點，避免空氣中微生物污染。

　　1、我們一般都用那種封口袋（塑料的），紙袋不容易保持水分。

　　2、當天采當天快遞回來，不用加冰袋。

　　3、快遞一般三天就到，對微生物菌群影響不大。

　　4、在冰柜中4度保存，時間不要超過一個月，盡量隨采隨做。菌株分離（seperation）就是將一個混雜著各種微生物的樣品通過分離技術區分開，并按照實際要求和菌株的特性采取迅速、準確、有效的方法對它們進行分離、篩選，進而得到所需的微生物的過程。

　　工業微生物產生菌的篩選一般包括兩大部分：一是從自然界分離所需要的菌株，二是把分離到的野生型菌株進一步純化并迸行代謝產物鑒別。

　　菌種可從以下幾個途徑進行收集和篩選：

　　（1）向菌種保藏機構和個人索取有關的菌株，從中篩選所需菌株。**外著名的菌種保藏機構有：微生物菌種保藏管理委員會（CCCCM），**典型菌種保藏中心（ATTC），英國國家典型菌種保藏所（NCTC），**的大阪發酵研究所（IFO）等。

　　（2）由自然界采集樣品，如土壤、水、動植物體等，從中進行分離篩選。

　　（3）從一些發酵制品中分離回的菌株，如從醬油中分離蛋白酶產生菌，從酒糟中分離淀粉酶或糖化酶的產生曲等。該類發酵制品經過長期的自然選樣，具有悠久的歷史，從這些傳統產品中容易篩選到理想的菌株。

　　菌株的分離和篩選一般可分為：采樣、富集、分離、產物鑒別、生化鑒定幾個步驟。

　　一、從土壤中采樣

　　1克土壤的含菌量大體有如下的遞減規律：細菌（108）＞放線菌（107）＞霉菌（106）＞酵母菌（105）＞藻類（104）＞原生動物（103）

　　（一）根據土壤特點

　　1．土壤有機質含量和通氣狀況

　　采土樣最好的上層是5―25cm、一般每克上中含菌數約幾十萬到幾十億個，并且各種類型的細菌和放線菌幾乎都能分離到。總的來說酵母菌分布土層最淺，約5―10cm；霉菌和好氧芽孢桿菌也分布在淺土層。

　　2．土壤的酸堿度和植被狀況

　　3．地理條件：南方、北方

　　4．季節條件：7―10月

　　（二）采樣方法

　　用取樣鏟，將表層5cm左右的浮土除去，取5―25cm處的土樣10―25g，裝入事先準準備好的塑料袋內扎好、北方土壤干燥．在10―30cm處取樣。給塑料袋編號并記錄地點、土壤土質、植被名稱、時間及其他環境條件。一般樣品取回后應馬上分離。以免微生物**。但有時樣品較多，或到外地取樣，路途遙遠，難以做到及時分離，則可采先用選擇性培養基做好試管斜面，隨身帶走。到一處將取好的土樣混勻，取3―4g撒到試管斜面上．這樣可避免菌株因不能及時分離而**。

　　二、根據微生物生理特點取樣

　　1．根據微生物的營養類型

　　每種微生物對碳、氮源的需求不一樣，分布也有差異。若需要篩選代謝合成某種化合物的微生物，從大量使用、生產或處理這種化合物的工廠附近采集樣品，容易得到滿意的效果。不少微生物對碳源的利用是不完全專一的，如以油脂為碳源的某些脂肪酶產生菌同樣也可以分解淀粉獲得能源而生長。

　　2．跟據微生物的生理特性

　　三、特殊環境下采樣

　　1．局部環境條件的影響

　　2．極端環境條件的影響

　　土壤微生物的知識 3

　　1.土壤微生物的類群

　　土壤中的微生物種類繁多，數量極大，一克肥沃土壤中通常含有幾億到幾十億個微生物，貧瘠土壤每克也含有幾百萬至幾千萬個微生物，一般說來，土壤越肥沃，微生物種類和數量越多。另外，土壤表層或耕作層中及植物根附近微生物數量也較多。土壤中的漸生物主要有細菌、真菌、放線菌、藻類和原生動物。土壤中的微生物以細菌數量最多，細菌占土壤微生物總量的70%～90%，而且種類多，它們多數是異養菌，少數是自養菌。放線菌的數量僅次于細菌，多存在于偏堿性的土壤中，主要是鏈霉菌屬、諾卡菌屬和小單孢菌屬等。放線菌雖然數量比細菌少，但由于其菌絲體的體積比單個細菌大幾十倍甚至幾百倍，所以在土壤中的生物量也相近于細菌。土壤中的真菌各種類型都有，但以半知菌類為最多，主要分布于土壤表層中。土壤中的藻類數量遠遠少于上述各類，主要有綠藻、硅藻等。土壤中的原生動物都是單細胞異養型的，主要是纖毛蟲、鞭毛蟲、根足蟲等。上要是纖毛蟲、鞭毛蟲、根足蟲等。

　　2.土壤微生物的作用

　　土壤中的微生物有些對農業有害。如反硝化細菌，能把硝酸鹽還原成氨散失到大氣中，降低土壤肥力。但多數是對農業有益的。

　　2.1合成土壤腐殖質

　　腐殖質是一種黑色的膠狀物質，它常與礦物質顆粒緊密結合在一起，成為土壤有機質的主要類型，對土壤肥力有重要的影響。腐殖質的形成，是由一些異養的微生物，如某些腐生細菌，把土壤中的動、植物殘體和有機肥料分解，然后再重新合成的。當土壤溫度較低，通氣差時，嫌氣性微生物活動旺盛，腐殖質合成速度加快，并得到積累。

　　2.2增加土壤有機物質

　　每當溫暖多雨季節，在潮濕的土壤表層藻類大量繁殖。藻類具有光合色素，通過光合作用制造有機物，增加土壤中的有機物質。固氮菌能固定空氣中的氮，成為自身的蛋白質，當這些細菌**和分解后，其氮素即可被植物吸收利用，并使土壤中積累很多氮素。

　　2.3促進營養物質的轉化

　　在土壤溫度高、水分適當、通氣良好的條件下，土壤中的好氣性微生物活動旺盛，腐殖質分解，**出其中的養分供植物吸收利用。硝化細菌能把有機肥料分解產生的氨轉變為對植物有效的硝酸鹽類。磷細菌分解磷礦石和骨粉，鉀細菌分解鉀礦石，把植物不能直接利用的磷和鉀轉化為能被植物利用的形式。土壤中的原生動物吞食土壤中的細菌、單細胞藻類、真菌孢子和有機物殘片等，對土壤中有機物的分解起著明顯的作用，并促進了物質的轉化。

　　2.4其他作用

　　土壤中的微生物除了上述的幾個作用外，還有一些其他的有益之處。如土壤中的真菌有許多能分解纖維素、木質素和果膠等，對自然界物質循環起重要作用。真菌菌絲的積累，能使土壤的物理結構得到改善。放線菌能產生抗生素。如我國使用的“5406”是由涇陽鏈霉菌制成的。總之土壤中的微生物對增加土壤肥力、改善土壤結構、促進自然界的物質循環具有重要作用。

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份（擴展5）

——土壤里的微生物教案實用1篇

　　土壤里的微生物教案 1

　　一、教學目標

　　(一)認知目標

　　1．介紹細菌、放線菌和真菌的形態結構、營養方式和生殖方式。

　　2．介紹微生物在自然界里的作用

　　(二)技能目標

　　培養學生的觀察能力、分析問題的能力

　　(三)情感目標

　　1．通過對微生物在生產生活中應用的學習，培養理論與實踐相結合的習慣。

　　2．通過介紹我國人民利用微生物造福社會的事例，激發學生的民族自豪感。

　　二、教學重點與難點

　　1．教學重點：微生物的形態、結構、營養方式。

　　2．教學難點：微生物的營養方式和生殖。

　　三、教學過程

　　（一）導入

　　一、認識細菌：

　　引入新課，教師接著指出：細菌分布廣泛，無論是空氣、水、土壤還是每個人身上都有細菌生活。但它是單細胞生物，個體十分微小，所以我們用眼睛看不到，下面我們就要了解一下細菌的形態和結構特點。

　　細菌形態①用高倍顯微鏡演示細菌的三種形態；②可以用顯微投影儀投影放大細菌的三種形態。③播放細菌顯微結構和亞顯微結構的錄像片段。細菌三種形態的示意圖。接著教師總結出細菌的形態：單細胞個體，從形態上分為：球菌、桿菌和螺旋菌三類。

　　（3）細菌的結構特點，讓學生與前面所學過的植物細胞結構進行比較找出相同點和不同點。注意強調：細菌細胞沒有成形的細胞核是細菌細胞與植物細胞在結構上的重要區別，所以細菌不屬于植物范圍。另外，有些細菌具有特殊結構如：①有的細菌具有鞭毛可在水中游動。②有的細菌在細胞壁外有莢膜、具有保護作用。

　　關于芽孢，教師應該指出：能否形成芽孢是細菌總的特征，不是所有細菌都能形成芽孢。芽孢是該菌種的休眠狀態，稱休眠體。注意說明芽孢的形成不是細菌的`繁殖方式，一個細菌只能生成一個芽孢，在適宜條件下，一個芽孢萌發形成一個菌體。芽孢對**環境有很強的抵抗力，壁很厚滲透性差，含水量極少。殺滅芽孢最有效的方法是高壓蒸氣滅菌法。一般情況下芽孢可以生存十多年。教師可以補充講述芽孢在生物防治和環境保護中的應用價值，例如：有些芽孢桿菌在形成芽孢的同時，產生晶體內含物，稱副芽孢體。蘇云金桿菌和**甲蟲桿菌等產生的副芽孢體對某些昆蟲有強烈毒性，因此有些國家用蘇云金桿菌等細菌作為殺蟲劑又稱生物農藥，既能消滅害蟲又不污染環境。

　　2．細菌生命活動特點：

　　（1）在講述細菌的生殖過程中要強調**生殖是單細胞生物普遍存在的生殖方式。特點是簡單、快速，屬于無性生殖。在講述生殖過程中，教師可參考教參中的示意圖邊講邊畫。

　　（2）細菌的營養方式的講述可用談話法。教師首先提出問題供學生討論：①植物是怎樣制造有機物獲得營養物質的？②植物制造有機物的條件是什么？③細菌不含葉綠素，它怎樣獲得營養？經討論后，教師做必要的總結。這樣學生就可以推論出細菌與植物的營養方式有本質的不同。接著引出異養的概念以及腐生細菌與寄生細菌的概念。強調腐生和寄生細菌的區別：腐生是從已死的或腐爛的動植物**中獲得有機物；寄生是從活的動植物體內或體表來吸取有機物來生活。

　　3．細菌對自然界的意義和與人類的關系：

　　（1）細菌對自然界的意義：本內容教師可運用講述與談話法相結合的方式進行。自然界中任何一種生物都有著誕生、生長發育、成熟、衰老和**的過程，這是生物的生命活動規律。生物體**后是否永遠保留在地球上？為什么沒有出現這種情況？讓學生回答，誰起了重要作用。腐生細菌的具體作用需要教師來講述。下面教師可畫簡圖讓學生連線填充說明三者之間的關系。

　　為加深學生了解腐生細菌對自然界中物質循環的作用，可布置課外小實驗，讓學生完成：

　　用一個廣口瓶里面放些土，把小昆蟲的尸體埋在土中。再把玻璃瓶埋入土中，瓶子不要加蓋。上面做好標記，過一段時間挖出來觀察，看看有何變化。

　　（2）在講述細菌與人類的關系之前，先讓學生討論，①細菌對人類是否都有害？②有益表現在哪些方面？有害表現在何處？而后教師根據學生的回答加以補充，要強調多數細菌對人類是有益的，有害的只是少數種類。糾正細菌都是有害的片面認識，培養學生學會用辯證唯物**觀點去看待分析客觀事物的能力。由于病原菌能引起疾病要教育學生在日常生活中養成良好的衛生習慣。

　　講完課后根據教學目標進行檢測，及時反饋。并請學生回答“動動腦”上的問題。布置學生看課外讀物的內容。

　　二、認識放線菌

　　1、出示放線菌的形態圖片（可選擇多種放線菌）。

　　2、請學生觀察，并總結放線菌的形態結構特征。

　　3、教師和學生共同總結放線菌的形態結構：放線菌由許多菌絲組成一個菌絲體。呈放射狀。

　　（二）放線菌的結構：

　　1、出示放線菌結構圖或高倍顯微鏡下放線菌的結構：

　　2、**學生觀察，總結出放線菌的結構特點。

　　3、教師總結：

　　放線菌的菌絲內沒有橫隔，是單細胞**。與細菌一樣，細胞內沒有成形的細胞核。

　　（三）放線菌的營養方式和生殖方式：

　　1、播放錄像：演示放線菌的菌絲類型及生殖過程。

　　2、教師講解：放線菌的菌絲分為營養菌絲和氣生菌絲。它靠營養菌絲吸收營養物質，營腐生生活。當生長發育到一定時期時，氣生菌絲頂端長出孢子絲，形成孢子。孢子散落出去，在適宜的條件下，萌發成新的菌絲體。

　　（四）放線菌與人類的關系：

　　1、請學生根據日常生活的經驗，談談自己對放線菌的作用的認識。（學生對放線菌不是非常了解，所以不要求一定能說出）

　　2、播放錄像。

　　3、教師和學生共同總結出放線菌與人類的關系

　　**：同學們吃過面包、香菇嗎？喝過啤酒嗎？看到過桔子發霉嗎？這些都與今天我們要學習的真菌有關。

　　三、認識真菌

　　（一）霉菌

　　請學生用放大鏡觀察“出毛”桔子皮。指出這個“毛”就是霉菌。霉菌種類很多，常見的有青霉、根霉，曲霉，它們都是真菌。出示掛圖并指出：桔子皮上的“毛”叫青霉；面包、饅頭發霉時長的“白毛”叫根霉；還有一種叫曲霉的霉能使花生、玉米變質。繼續據圖講解，霉菌體形較大，大多是多細胞的，有細胞核，長在基質內的叫營養菌絲，伸出基質外的稱為氣生菌絲，氣生菌絲上常產生孢子，孢子能產生下一代，故氣生菌絲又稱繁殖菌絲。

　　問：霉菌生活在怎樣的環境中？霉菌細胞中有葉綠體嗎？

　　指出霉菌多數腐生也有營寄生生活的。如有的人皮膚上出現一塊“白斑”，這“白斑”就是由霉菌引起的。但霉菌對人類也有好處，如利用霉菌制霉豆腐，從青霉中提取青霉素等。

　　（二）食用菌

　　觀察“磨菇”，指出磨菇也是一種真菌，我們把象磨菇一類的可食用的真菌稱為食用菌，常見的有香菇、磨菇、木耳、金針菇等。出示掛圖，請學生看第10頁第三、四、五自然段的課本內容，并弄清楚放在桌上的磨菇（或金針菇）的各部分結構名稱及作用。

　　請一個學生指著新鮮磨菇（或金針菇）講一遍各部分結構和功能，以鞏固有關知識。

　　（三）真菌

　　問：這節課學了哪些生物？學生回答后指出這些都屬真菌。

　　出示常見真菌比較的投影片

　　常見真菌比較表形態結構、營養方式、繁殖、與人類關系

　　（四）微生物在自然界中的作用

　　教師講解：細菌和真菌統稱為微生物。因為它們大多營腐生生活，能把動植物的尸體及排遺物分解，使有機物轉變成無機物，因此又稱分解者。再根據課本圖1－17講解自然界中有機物與無機物的循環，從而說明微生物在自然界中的重要作用。

　　（五）課堂小結

　　教師根據板書小結。

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份（擴展6）

——土壤里的微生物說課稿范文1份

　　土壤里的微生物說課稿 1

　　作為一位杰出的老師，時常需要編寫說課稿，說課稿有助于學生理解并掌握系統的知識。那么優秀的說課稿是什么樣的呢？以下是小編為大家收集的土壤里的微生物說課稿范文，僅供參考，大家一起來看看吧。

　　一、指導思想和理論依據

　　《小學科學課程標準》提出：科學課程不僅要使學生獲得重要的基本的科學概念并認識科學概念之間的聯系，還要使學生獲得科學探究的技能和方法，以及合作交往、語言表達的能力。因此，教師在教學中，必須創造多種機會讓學生進行科學探究，在親身參與科學活動的過程中，發現問題。引導他們主動思考問題，自己設計實驗，注重思考事實證據和科學結論之間的關系，感受科學過程，獲取事實證據，檢驗自己的想法，逐步形成科學態度和情感。

　　二、說教材

　　1、教學內容分析

　　《土壤里的微生物》一課，是青島版版四年級《科學》土壤與植物，這一單元的第一課，是在學生對巖石、沙和黏土有了一定認識的基礎上，進一步對自然中的土地進行了解。本課的核心內容是讓學生提出問題，并通過觀察、實驗等多種**，了解土壤是由哪些物質組成的。

　　2、學生情況分析

　　本校學生生活在農村，經常到不同的環境中玩，自然也就經常接觸土壤，可以說他們對于土壤是熟悉的。但是，作為四年級的小學生，在玩耍的同時可能從來沒有細心的觀察過土壤。或者，他們對所見到的土壤已經****了，沒有深入的思考過。因此，也可以說他們對土壤又是陌生的。但是他們具有天生的好奇心和探究欲望，只要教師稍加引導，就能激起他們對土壤的研究興趣。

　　四年級學生雖然接觸科學學科已經一年多，已經學會了一些科學研究的方法，但是還沒有熟練地掌握，還不能很好地運用這些方法進行科學研究。特別是我們學校，由于科學試驗儀器缺少，學生很少有親自操作實驗的機會，**實驗的能力也就非常差，需要教師給予更多的幫助。

　　三、說教法

　　1、知識與能力：能夠通過看、聞、攥、捻等多種**對土壤進行研究。通過觀察、實驗知道土壤不是一種單純的物質，它是由砂、黏土、水、空氣和生物殘體等成分構成的。初步了解土壤可以根據含砂的多少分為黏質土、砂質土和壤土等幾種。

　　2、過程與方法：在教師的引導下設計并做砂、黏土和腐殖質的分離實驗，并對實驗現象進行分析、概括。

　　3、情感、態度、價值觀：初步形成對土壤的好奇心和探究欲望，對土壤產生親近感。愿意與同學合作進行實驗。初步感受到我國土壤資源的豐富。

　　教學重點：能夠在教師的引導下設計并做砂、黏土和腐殖質的分離實驗，從而知道土壤是由砂、黏土、水、空氣和生物殘體等成分構成的。

　　教學難點：能夠在實驗中發現一些實驗現象，如冒氣泡、水面有腐爛的葉片或小蟲子的尸體、不同的土壤里砂的含量不同等，并能夠對這些實驗現象進行分析。

　　四、教學準備

　　1、課前準備：帶領學生到不同環境里采集不同種類的土壤樣本。讓學生觀察周圍環境，了解土壤存在的環境。

　　2、技術準備：成分各不相同的土壤若干份、分組實驗的儀器，如：玻璃杯、水、筷子、放大鏡等。

　　五、說過程

　　1、教學引入時，問學生：上課前我們在田野里挖了一些土，觀察一下，它們和砂、黏土一樣嗎？有什么不同？讓學生初步感知土壤與砂、黏土的區別，了解土壤的組成。學生只要能說出自己的看法就行了。教師給出結論：像這樣的土，我們叫它土壤。

　　2、初步了解了土壤之后，讓學生說一說在采集土壤時有什么發現？學生可能會說土壤上能夠長草、樹和莊稼；土壤里有蚯蚓；土壤濕乎乎的等等，教師要給予肯定。這樣，使學生對土壤有了進一步明確的認識。

　　3、接下來讓學生用自己掌握得方法，如：看、聞、攥、捻、用放大鏡觀察等方法對土壤進行研究。學生可能會發現土壤是濕的，說明土壤里有水；土壤里有小石子和砂粒；土壤里有細面面的土；土壤里有死的小蟲子等等。在學生對土壤的成分有一個初步的判斷之后，引出土壤成分分離實驗。

　　4、過渡：我們通過研究，已經初步確定了土壤中的一些成分。到底大家的判斷對不對呢？你有什么辦法把土壤中的'各種成分分離開嗎？學生可能想到用篩子篩、把土壤鋪開后一點一點挑等。

　　5、在學生不能說出正確的方法時，教師出示玻璃杯、筷子、水，引導：你能用這些實驗器具和實驗材料設計一個實驗，讓土壤中的各種成分分離開嗎？學生可能會想到用水分離土壤中的各種成分，并分組設計實驗。如果學生還不能想到怎么實驗，教師可以進一步引導：土、砂子、草葉等如果放到水里，可能出現什么情況？從而引導學生設計出分離實驗。

　　6、在學生設計實驗之后，就要分組進行實驗，并記錄實驗現象，通過匯報交流，總結出土壤中的主要成分。

　　7、在學生成功地進行了土壤分離實驗，并分析了土壤的成分之后，教師**學生進一步通過實驗研究成分不同的土壤，使學生知道不同的土壤含沙量是不一樣的。通過講解使學生知道，含砂多的土壤叫砂質土，含黏土多的土壤叫黏質土，含砂和黏土差不多的土壤叫壤土。

　　8、最后，**學生對本節課的實驗和所學到的知識進行總結，引導他們進一步研究自己見到的土壤，使他們鞏固學到的方法，為下一步的學習打下基礎。

　　六、教學評價

　　1、知識評價：采用檢測題的形式

　　（1）填空：土壤是由（ ）、（ ）、（ ）、（ ）和（ ）構成的。

　　（2）說一說，土壤可以分為哪幾類？是怎樣分的？

　　2、能力評價：

　　主要采用課上觀察的形式，看學生是否能否在教師的引導下，運用多種方法研究土壤的組成；能否設計、實施土壤成分分離實驗，并對實驗現象進行分析、綜合。

　　3、情感評價：采用課上觀察的形式

　　主要看學生是否能積極主動得對土壤進行探究，是否能夠與小組成員合作。

　　七、教學特色

　　同以往的教學設計相比，在本課的教學設計中，始終注重學生的參與、實踐，使他們的探究能力得到鍛煉和提高。如：課前讓學生親自去采集土壤樣本，使學生對土壤有一個初步的了解；課堂上讓學生提出探究問題，并利用自己學會的實驗方法初步進行探究；設計并實施土壤成分分離實驗，觀察實驗現象并進行分析等。所有的活動都是學生在動、在思考、在探究，從而使他們的探究能力得到了很好的鍛煉和提高。

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份（擴展7）

——大豆干旱和低溫cDNA文庫的構建與檢測范本一份

　　大豆干旱和低溫cDNA文庫的構建與檢測 1

韋正乙,蔡勤安,邢少辰,WEI Zheng-yi,CAI Qin-an,XING Shao-chen(吉林省農業科學院生物技術研究中心,吉林長春,130124)?

云南騰沖熱泉土壤微生物基因組文庫的構建與分析(一)份（擴展8）

——大鼠肺泡巨噬細胞酵母雙雜交cDNA文庫的構建與篩選優選【一】篇

　　大鼠肺泡巨噬細胞酵母雙雜交cDNA文庫的構建與篩選 1

大鼠肺泡巨噬細胞酵母雙雜交cDNA文庫的構建與篩選

目的構建脂多糖(LPS)和****(Dex)作用后的肺泡巨噬細胞(AMs)酵母雙雜交cDNA文庫,探尋炎癥條件下與糖皮質激素受體(GR)相互作用的蛋白質分子.方法用LPS(10mg/ml)和Dex(10-5mol/L)作用于原代培養的肺泡巨噬細胞4h后,從肺泡巨噬細胞中提取總RNA,再以SMARTⅢTM和CDSⅢoligo(dT)為引物進行PCR擴增,得到兩端具有同源臂的雙鏈cDNA,后者純化后,與線性質粒pGADT7-Rec共轉化感受態酵母菌AH109,二者在酵母細胞中同源重組成環形的有復制活性的cDNA文庫質粒,收集在缺亮氨酸(Leu)培養板上篩選出所有克隆,即為AMs酵母雙雜交文庫菌.進而通過誘餌質粒pGBKT7-GR轉化構建成功的文庫菌,篩選與GR相互作用的蛋白分子.結果構建了具有基因多樣性和庫容量足夠大的AMs cDNA文庫,共獲得1.07×106個轉化子,插入的雙鏈cDN**段的長度在0.3～1.5kb之間.篩選文庫獲得1個真陽性克隆,經測序和同源性比較證實該克隆為BAG-1.結論利用Clontech SMART技術成功構建了肺泡巨噬細胞的酵母雙雜交cDNA文庫;GR與BAG-1在酵母細胞中存在著相互作用.

劉玉秀(210002,南京,****南京總醫院科研科)

錢桂生(第三軍醫大學新橋醫院全軍呼吸內科研究所)

羅向東(第三軍醫大學西南醫院燒傷研究所)?