人冠狀病毒NL63核殼蛋白和棘突蛋白的表達及其在血清學檢測中的初步應用 1

人冠狀病毒NL63核殼蛋白和棘突蛋白的表達及其在血清學檢測中的初步應用

目的:重組表達人冠狀病毒NL63(HCoV-NL63)的核殼蛋白(N蛋白)及棘突蛋白(S蛋白),用于檢測血清中的相應抗體.方法:用原核表達系統表達HCoV-NL63的N蛋白,建立檢測N抗體的Werstern印跡法;用真核表達系統表達HCoV-NL63的S蛋白,建立檢測S抗體的間接免疫熒光(IFA)法.結果:經Werstern印跡檢測,重組S蛋白和N蛋白表達正確;初步建立了N蛋白純化方法.利用建立的檢測方法,檢測了100份正常**血清,總陽性率為81%.其中S抗體陽性率為66%,N抗體陽性率為38%,S抗體和N抗體均為陽性的占總數的22%,雙抗體均為陰性的占總數的19%;S抗體的檢出率明顯高于N抗體.結論:重組HCoV-NL63 N蛋白及S蛋白表達成功;S抗體和N抗體共同檢測可獲得較好的檢測結果,減少漏檢.

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人冠狀病毒NL63核殼蛋白和棘突蛋白的表達及其在血清學檢測中的初步應用（精選1篇）（擴展1）

——SARS冠狀病毒中的核衣殼蛋白合集一篇

　　SARS冠狀病毒中的核衣殼蛋白 1

SARS冠狀病毒中的核衣殼蛋白

嚴重急性呼吸綜合征(SARS)的元兇是一種新冠狀病毒,研究病毒結構蛋白的功能有助于了解病毒的感染、復制和包裝等生理過程.其中核衣殼蛋白是SARS冠狀病毒中含量最豐富和最保守的結構蛋白,自身聚合后包被病毒RNA基因組形成螺旋狀核殼體是SARS冠狀病毒成熟的關鍵步驟;核衣殼蛋白能與病毒或宿主細胞中多種蛋白質相互作用,還能影響宿主細胞的多個通路.因此核衣殼蛋白是一個重要的多功能蛋白質,參與了病毒感染、復制和病毒包裝等過程.

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——磁性核殼納米粒子的制備及其在分離和光譜檢測中的應用實用一份

　　磁性核殼納米粒子的制備及其在分離和光譜檢測中的應用 1

摘要：磁性及其核殼復合納米粒子由于在不同領域中具有廣泛應用而受到研究者的極大關注,總結了磁性及磁性核殼納米粒子常見的制備方法及各自的特點,并重點討論了其在磁分離及光譜檢測方面的'應用,也介紹了本課題組在納米粒子合成及應用方面所做的一部分工作.最后對磁性納米粒子中存在的問題進行了探討,并對其應用前景進行了展望. 作者： 陳帥??姚建林??郭清華??顧仁敖 Author： CHEN Shuai??YAO Jian-lin??GUO Qing-hua??GU Ren-ao 作者單位： 蘇州大學材料與化學化工學部,江蘇蘇州,215123 期 刊： 光譜學與光譜分析 ? ISTICEISCIPKU Journal： Spectroscopy and Spectral ****ysis 年，卷(期)： 2011,?31(12) 分類號： O657.3 關鍵詞： 磁性核殼納米粒子 ?? 磁分離 ?? 光譜檢測 ?? 機標分類號： TP2 TQ6 機標關鍵詞： 磁性納米粒子????核殼納米粒子????制備方法????磁分離????光譜檢測????Detection????Application????復合納米粒子????合成及應用????應用前景????研究者????課題組????檢測方????總結????問題????特點????討論????分工 基金項目： 國家自然科學基金，江蘇省自然科學基金，教育部博士點基金 磁性核殼納米粒子的制備及其在分離和光譜檢測中的應用[期刊論文]??光譜學與光譜分析 --2011,?31(12)陳帥??姚建林??郭清華??顧仁敖磁性及其核殼復合納米粒子由于在不同領域中具有廣泛應用而受到研究者的極大關注,總結了磁性及磁性核殼納米粒子常見的制備方法及各自的特點,并重點討論了其在磁分離及光譜檢測方面的應用,也介紹了本課題組在納米粒子合...
人冠狀病毒NL63核殼蛋白和棘突蛋白的表達及其在血清學檢測中的初步應用（精選1篇）（擴展3）

——重組SARS冠狀病毒S蛋白的原核表達研究范文1份

　　重組SARS冠狀病毒S蛋白的原核表達研究 1

**,CHEN Gong(國家微檢測系統工程技術研究中心/西北大學生物芯片研發中心/陜西北美基因股份有限公司,陜西,西安,710069)

蒙世杰,MENG Shi-Jie(西北大學,生命科學學院,陜西,西安,710069)?

人冠狀病毒NL63核殼蛋白和棘突蛋白的表達及其在血清學檢測中的初步應用（精選1篇）（擴展4）

——sTNFR Ⅱ和VIP融合蛋白的基因克隆表達、純化及活性檢測通用1篇

　　sTNFR Ⅱ和VIP融合蛋白的基因克隆表達、純化及活性檢測 1

sTNFR Ⅱ和VIP融合蛋白的基因克隆表達、純化及活性檢測

可溶性腫瘤壞死因子受體Ⅱ(sTNFRⅡ)和血管活性腸肽(VIP)對類風濕性關節炎(RA)均有治療作用,但兩者的作用機制不同.制備兩者融合蛋白,可能具有更好的防治類風濕關節炎的作用.用含有VIP基因序列的上游引物和sTNFRⅡ的下游引物,用PCR擴增出由連接序列將VIP和sTNFRⅡ基因連接的片段,再亞克隆到原核表達載體pET32a,在大腸桿菌DH5α內誘導表達.表達的產物經離子交換、疏水層析純化,并用體外中和試驗檢測其抑制TNF細胞毒及肝細胞膜特異性脂蛋白(Lsp)誘導的細胞毒生物活性.結果顯示構建的pET32a-VIP-sTNFRⅡ表達載體在大腸桿菌DH5α內以包涵體形式表達,疏水層析結合離子交換層析純化后,融合蛋白具有較好的抑制炎癥分子誘導的炎癥反應生物活性,為將來應用打下基礎.

人冠狀病毒NL63核殼蛋白和棘突蛋白的表達及其在血清學檢測中的初步應用（精選1篇）（擴展5）

——廢棄兔毛蛋白脫色劑制備及其應用?（精選1篇）

　　廢棄兔毛蛋白脫色劑制備及其應用? 1

廢棄兔毛蛋白脫色劑制備及其應用?

采用正交實驗的方法,研究了廢棄兔毛堿法溶解制成兔毛蛋白脫色劑的最佳條件: 10g/L NaOH,4g/L 尿素,溶解溫度95℃,溶解時間60min.探討了兔毛蛋白脫色劑對活性艷紅K-2BP模擬廢水的脫色效果,結果表明,400mg/L兔毛蛋白脫色劑在脫色pH值為1.0～4.0,室溫(25℃)下脫色5min,脫色效果較好.?

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——淺談膠原蛋白在造紙中的應用工學論文范文一份

　　淺談膠原蛋白在造紙中的應用工學論文 1

　　膠原纖維是構成皮的主要成分,膠原蛋白是形成膠原纖維的基本單位,由三條肽鏈相互纏繞成螺旋結構。膠原纖維具有微彈性和很高的抗張強度,并且還有許多獨特的性質如高耐磨性、絕熱性、吸音性和柔韌性等。

　　膠原蛋白除具有蛋白質的一般性質外,還有許多特有的性質。這是由其特殊的組成和結構所決定的。一般的蛋白質是由2條肽鏈形成雙螺旋結構,而膠原蛋白由3條肽鏈結合形成三螺旋結構。膠原蛋白特有的左旋 A鏈相互纏繞構成的膠原右手復合螺旋結構中,其最大特點是膠原分子中含有大量甘氨酰、脯氨酰、和甘氨酰為甘-脯氨酰以外的其它任何氨基酸殘基,且呈周期性排列。其中甘氨酸占30%,脯氨酸和羥脯氨酸共占約25%。膠原肽鏈間存在離子鍵、氫鍵、范德華力及非極性基團產生的疏水鍵等作用力。同時,膠原分子內和分子間還存在醇醛縮合交聯 、醛氨縮合交聯和醛醇組氨酸種交聯。使得膠原的2條肽鏈、3條肽鏈牢固地連接起來,具有很高的抗張強度。膠原分子間按四分之一錯列方式超分子聚集形成穩定的韌性很強的原纖維,原纖維進一步聚集形成膠原纖維。

　　2. 膠原蛋白的提取

　　目前提取膠元蛋白主要從皮革廢棄物中,**外已有不少研究。根據文獻,從鉻革屑中提取膠方法很多,根據處理劑的不同其提取方法分為以下幾種。

　　2.1堿處理法

　　堿處理法的原理是堿液中的OH-離子進入絡合物內界,將膠原羧基從鉻絡合物中取代出來,使膠原脫鉻且同時發生降解,然后溶于水,Cr3 與OH-離子形成沉淀。經過壓濾或離心分離,可將膠原溶液與Cr(OH)3沉淀分離。陳武勇等對CaO提取鉻鞣革屑中的膠原蛋白的影響因素進行了研究,確定了氧化鈣提取膠原蛋白的最佳條件和方案。

　　2.2酸處理法

　　酸處理法的原理是在酸性條件下,鉻配合物發生解離,隨著H 濃度增大,離解速度加快,配合物的分子變小,失去鞣制作用,達到脫鉻提取膠原蛋白的目的。利用酸水解法分離膠原纖維,H2SO4的濃度越大,水解時間越短,但濃度大于4%,在70℃以下,鉻鞣革屑(削勻屑)水解完全所需的時間為2h左右;而且溫度的影響也很大,高于70℃時,水解對時間的依賴性減弱。但是酸處理法對膠原的水解程度大,只能得到小分子的膠原降解物,而且Cr3 在酸性條件下處于溶解狀態,很難與膠原蛋白徹底分開。

　　2.3氧化法

　　氧化法的原理是在弱堿性條件下,利用氧化劑(通常H2 02)將鞣革廢渣中Cr3 氧化成Cr6 (成為可溶性的鉻酸鹽),使Cr6 從蛋白質的肽鏈上脫落下來,從而實現鉻與膠原蛋白的分離。如在堿性介質中,根據雙氧水氧化三價鉻的原理,采用酸-堿-氧化交替的方法,也可獲得低含鉻量的膠原,并保持了膠原分子的結構。王遠亮等采用堿性脫鉻劑和氧化劑配合使用的脫鉻方法,脫鉻效果顯著,脫鉻后膠原含鉻量低。大量研究表明:用氧化法脫鉻,速度快,對膠原的結構破壞程度小,獲得的膠原產物分子量較大,色澤好,脫鉻效果好,但在處理過程中會產生有毒的Cr6 。

　　2.4 酶處理法

　　酶處理法的原理是用酶水解鉻革屑,使其中的鉻絡合物與蛋白質脫鞣,分離 出鉻 鹽和已部分水解的膠原。Cabeza改進了一步酶法,用兩步酶法(先用胃蛋白酶提取,再用堿性蛋白酶提取)提取2種不同的膠原水解產物。酶處理法條件溫和,對蛋白質的成分破壞小,所得膠原蛋白純度高,水溶性好,物理化學性質穩定,但如果單獨使用,反應過程很慢。

　　由于以上幾種方法各有其優缺點,因此目前在提取膠原蛋白時,常把幾種方法結合起來。如堿酶處理法,即在提取膠原蛋白時,先用堿對鉻革屑進行輕度處理,然后再用酶進行二次處理,這樣可以增加膠原的提取率和反應效率。

　　3. 膠原蛋白的化學性質

　　3.1 與亞硝酸反應

　　蛋白質或氨基酸的氨基與亞硝酸反應,側氨基或端氨基被分解,并且出放的氮氣,通過測定**的氮氣量可以計算蛋白質的斷蛋白質的水解程度和速度 。

　　3.2 與甲醛反應

　　甲醛滴定法可用來測定氨基酸的含量,其原理是甲醛在氨基上發生加成反應生成N-羥甲基衍生物。繼續反應,產生N-二羥甲基衍生物,從而將**氨基封閉,保護氨基。用堿溶液滴定**羧基的數量,可計算出蛋白質的含量。

　　3.3與茚三酮反應

　　蛋白質或氨基酸的溶液滴加幾滴茚三酮溶液后加熱至沸,溶液即呈藍紫色,而脯氨酸和羥基脯氨酸因為是亞氨基。產生黃色。這個反應常用于氨基酸的比色定量分析。

　　3.4 與酸、堿的作用

　　膠原肽鏈的端基和側鏈均含有氨基和羧基,即存在許多堿性基團和酸性基團,它們在溶液中能與酸和堿結合。結合后,膠原分子間及肽鏈間的離子交聯鍵和氫鍵將被打開。隨著時間延長,各種交聯鍵和次級鍵逐漸被破壞。膠原發生酸溶或堿溶,甚至有可能發生主鏈降解。當加熱至沸騰,膠原逐步由大肽水解成小肽,直至成氨基酸。

　　3.5 與鹽基的作用

　　在鹽溶液中膠原肽鏈間的離子鍵被鹽打開,從而吸水膨脹。各種離子對膠原膨脹能力的大小影響如下。陽離子:Ca2 >Li >Na >K >Rb2 >Cs2 ;陰離子:CNS->I->NO->Cl->CHCOO->SO32->酒石酸根>檸檬酸根。中性鹽會造成膠原的膨脹,有的造成脫水。

　　4. 膠原蛋白在造紙中的應用

　　隨著社會的發展,膠原蛋白的應用也越來越廣。由于膠原蛋白纖維具有一些植物纖維所沒有的性質,所以它也將逐漸的被應用于造紙行業。

　　4.1 作為造紙增強劑

　　膠原纖維和植物纖維這兩種天然高分子都含有許多活性基團和活性部位,皮革固體廢棄物在經處理變成膠原纖維的過程中比木材制漿過程中活性基團暴露得更多,更易反應,為兩種纖維結合提供了良好的條件。膠原纖維作為一種助劑加入漿中可用于紙的增強,它與植物纖維纏繞、交織,以氫鍵力、離子鍵、共價鍵、范德華力和靜電吸引力等方式結合,這些鍵的形成使得成紙纖維間的結合力增大,鍵能升高,從而使紙張的物理強度得到提高。

　　膠原蛋白是由許多-氨基酸通過肽鍵構成的多肽鏈,膠原分子的側鏈上含有許多極性基團,纖維素分子中含有大量的羥基和少量羧基等基團。調節不同的介質可以使膠原纖維與纖維素大分子以氫鍵、離子鍵以及共價鍵的形式結合,這些鍵的形成使得紙纖維間的'結合力增大,鍵能升高,從而使紙張的物理機械強度得以提高,使紙的吸水性、透氣性、緊度等物理指標有所改善。另外,將膠原進行陽離子改性或陰離子改性,分別制成的陰離子(陽離子)造紙增強劑,可以使裂斷長增加,撕裂指數提高。

　　4.2 膠粘劑

　　膠原蛋白作為膠粘劑,可以作為造紙的施膠劑,但是其耐水性能較差。通常在膠原蛋白粘合劑中加多聚甲醛作硬化交聯劑,可得到類似脲醛樹脂的效果,并增加抗水能力,使得膠原分子鏈間形成交聯鍵,使黏度提高,加強了凝固的結構,提高了膠原蛋白的機械性能。

　　膠原蛋白作為膠粘劑,可用于紗布、砂紙的制造,此外也可用于生產膠帶紙。將經過化學處理的明膠用于鑄涂紙的生產,與原來的生產及產品相比,車速提高1倍,光澤度由30%提高到39%,而生產成本基本不變。

　　4.3 表面活性劑

　　表面活性劑的分于由性質完全相反的2部分組成,即親水性和憎水性基團,2種基團的比例(HLB值)決定了表面活性劑的親水性和憎水性的強弱。HLB值愈大,則親水性愈強,憎水性愈弱。膠原蛋白分子結構中既有氨基,又有羧基,在不同的介質中呈現出雙親性;各種氨基酸的氨基各不相同。在結構上有不對稱性,故在一定程度上也有表面活性。

　　早在20世紀60年代就有人研究將膠原蛋白作為廢報紙回用的脫墨劑,通過膠原蛋白和其他聚合物復配使用,對廢紙漿的白度有明顯的提高。例如使用3%亞硫酸鈉、0.5%TPP(三聚磷酸鈉)、l%脂肪酸鹽和0.295膠原蛋白(相對分于質量為10000,等電點為5),脫墨后,廢紙漿的白度達到60%ISO。

　　參考文獻:

　　[1]陳武勇、黃瓚, 廢革屑提取膠原蛋白的研究[J]. **皮革, 2002, 31(23): 1-5.

　　[2]孫丹紅、石碧, 含鉻廢革屑氧化脫鉻方法的研究[J]. 皮革科學與工程, 2002, l2(9): 3l-3.

　　[3]王遠亮、黃興春, 鉻革削勻屑脫鉻方法的研究[J]. **皮革,1991, 20(12): 7-l2.

　　[4]Cabeza L F, Isolation of protein products L4J from chromium-containing leather wastes using two consecutive product: pilot plant studies[J]. J Soc Leather Tech Chem, 1999 (83): 14-l9.